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연구 보고서
중장기적인 정책연구과제와 대안을 포괄적인 시각에서 이론적 · 실중적 분석을 통해 제시함으로써 연구원의 설립목표를 가장 잘 실행하고있는 보고서입니다.
DNA 손상지표 코멧시험(Comet assay)를 활용한 3차원 배양세포에서의 유전독성영향연구
- 연구책임자
- 임철홍 외 1명
- 수 행 연 도
- 2021년
- 핵 심 단 어
- 주 요 내 용
1. 연구배경
o 발암물질의 확인을 위해 수행되는 실험동물을 이용한 발암성시험은 많은 시간과 비용뿐 아니라 과도한 실험동물의 희생이 요구됨에 따라,
- 발암가능성이 높은 화학물질에 대하여 우선적으로 적용할 필요가 있음
o 현재 발암가능성이 높은 화학물질을 선별하기 위해 미생물복귀돌연변이시험 등 체외시험법과 실험동물을 이용한 소핵시험 등 생체 시스템에서의 유전독성 시험법이 동시에 활용되고 있으나,
- 시험의 용이성, 민감도, 특이도 등에서의 한계를 극복한 새로운 시험방법의 개발이 요구되고 있으며,
- 생명윤리가 강화되는 현실에서 생체 시험을 대체할 수 있는 시스템 또한 요구되고 있음
o 화학물질의 유전자와 염색체에 대한 영향을 간접적으로 확인하는 코멧시험은 기존의 미생물 복귀돌연변이시험과 소핵시험을 대체 또는 보완할 수 있는 시험법으로의 가능성이 높게 평가되고 있으며,
- 특히 생명윤리가 강화되는 현실에서 동물시험의 대체를 목표로 하는 3차원 세포배양 시스템에서의 적용성이 높은 것으로 보고되고 있음
o 따라서, 본 연구에서는 3차원 세포배양 시스템에서의 코멧시험법을 확립하여 발암성평가에 있어 보다 다양한 정보를 제공하고자 함
2. 주요 연구내용
□ 연구결과
o 3차원 세포배양
- Hang-in drop/저부착성 플레이트 복합 배양법과 저부착성 플레이트 단독 배양법을 검토한 결과 Hang-in drop/저부착성 플레이트 복합 배양법에 의한 세포가 더 둥근 구형으로 배양되는 것이 확인되었음
- 따라서 본 연구에서는 Hang-in drop/저부착성 플레이트 복합 배양법을 3차원 세포배양 시스템으로 선택하였음
o 코멧시험
- CHL/IU 세포와 HepG2 세포를 이용하여 음성대조물질 d-mannitol, 양성대조물질 ethyl methanesulfonate, 대사활성화 양성대조물질 cyclophosphamide를 사용하여 2차원 및 3차원 세포배양 시스템에서 코멧시험의 타당성을 검토한 결과,
· HepG2 세포를 이용한 3차원 배양 시스템이 코멧시험에 가장 적합한 것으로 나타났음
- HepG2 세포의 3차원 배양 시스템에서 2-methoxyethanol과 benzalkonium chloride의 코멧시험을 실시한 결과,
· 2-Methoxyethanol은 양성, benzalkonium choloride는 음성으로 나타났음
□ 시사점
o 본 연구를 통하여 HepG2 세포를 이용한 3차원 세포배양시스템에서의 코멧시험은
- 발암가능성이 높은 화학물질의 탐색에 활용 가능함이 확인되었고,
- 본 연구를 통하여 2-Methoxyethanol은 양성, benzalkonium choloride는 음성임이 확인되었음
3. 연락처
o 연구책임자: 산업안전보건연구원 산업화학연구실 임철홍
o 연락처: 042-869-0531
o e-mail: limch@kosha.or.kr
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문의처
- 연구기획부
- 제유리
- 052-703-0814
